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本文根据第22届全国医院制造大会“查验中心制造与装备装备专题论坛”上海市公共卫生临床中心查验医学科主任朱召芹的讲演整理而成，经过自己审理。

p#实验室，统称为生物安全实验室，是经过高级防护屏障和一系列处理方法，可以防止人体和环境或控制被操作的有害生物因子危害，达到某种生物安全要求的生物实验室和动物实验室。

生物安全实验室根据查验方针不同可分为生物安全一级实验室、生物安全二级实验室（BLS-2，ABSL2，P2）、生物安全三级实验室（BSL-3，ABSL-3，P3）、生物安全四级实验室（BSL-4，P4），根据功用不同可分为PCR实验室、血库实验室、生化免疫实验室、临床查验实验室、临床微生物实验室、科研实验室和发热门诊实验室等。

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上海市公共卫生临床中心概况

上海市公共卫生临床中心是一所具百年前史的三级甲等医院，又叫复旦大学从属公共卫生临床中心，始建于1914年，历经100余年的组织变迁与生长，不断进步突发和新发盛行症应急防控的才干，供应盛行症病原临床检测研讨途径和突发应急收治患者确保，承担着确保上海地区长远城市安全的重任。

现在科室分为医学临检、临床生物化学、临床免疫、核酸扩增、临床微生物一般菌和医学微生物结核等6个专业组，并配有专职的前处理和抽血的人员。在专业上注重结核、肝炎和艾滋病等医学查验的关键学科的制造，承担院感、血库、噬菌体研讨所和结核病研讨中心等作业，是************在P3实验室打开临床查验的医院。

组织变迁

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生物安全实验室的制造要求

生物安全实验室是经过标准的实验室规划改造、实验室设备的装备及个人防护装备的运用，严峻遵循标准化的作业程序和处理规程等，确保操作生物风险因子的作业人员不受实验方针的损伤，确保周围环境不受其污染，确保实验因子坚持原有本性的实验室。

生物安全实验室的分级

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BSL-1与BSL-2实验

BSL-1一级生物安全水平，适用于一般微生物教学、研讨；BSL-2二级生物安全水平，适用于临床卫生服务和查验、研讨。BSL-2实验室在BSL-1设备的基础上做了功用的进步，如实验室的门能自动关闭并配有有可视窗；不需求特其他通风设备，但窗户要求能翻开并且设备防虫纱网；可靠的电力供应与应急照明，培育箱、生物安全柜、冰箱最好添加备用电源；实验室出口有黑私自可明确辨识的标识等。

BSL-2实验室

表1 I级、II级及III级生物安全柜之间的差异

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BSL-2与BSL-3实验室

基础实验室供应二级生物安全水平初级卫生服务，用于确诊和研讨，装备于医院查验科、疾病防范控制中心（CDC）。屏障实验室供应三级生物安全水平，用于高等级微生物的确诊、研讨，一般装备于专门的科研组织、CDC。实验室设置两级屏障，一级屏障包括生物安全柜、离心机负压罩等规划，二级屏障包括平面布局、维护结构、控制进口、负压环境、通风系统等规划。

一级屏障的生物安全柜，要求全部和感染性物质有关的操作均需在生物安全柜或其他底子防护设备中进行；离心机等需求其他装备防护用附件（如安全离心桶或防护转子）。二级屏障中规划独立的通风空调系统，气流方向和压力梯度由“非防护区”流向“防护区”，通风空调为直排式，不得选用回风系统，进风要经初中高效三级过滤。此外，还要考虑可能在部分其他设备带有HEPA高效空气过滤器的排风系统以及设备系统平面布局负压系统通风系统。

表2 生物安全风险点评

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P3、P4实验室制造要求

（1）我国的P4实验室

截至现在，我国在武汉建成并投入运用一家P4实验室，它是借鉴于法国里昂P4实验室的成功经验和实验设备规划师一同承建的，我国科学院与武汉市人民政府经过了国家卫计委的严峻现场点评。这了标志着我国正式具有了研讨和使用烈性病原体的硬件条件，为我国生物科研人员在自己的国家供应了很好的研制条件。

P4实验室数量多少并不重要，重要的是安全作业到不到位，研制才干强不强。

◆P4实验室制造要求

P4实验室非同于一般的生物实验室，它有最高的安全级别架构。武汉P4实验室内有四层结构：最基层为污水处理和生命维护系统；中心两层是中心实验室及气体过滤系统；最上面一层是空调新风系统；并且每层实验室均24小时始终坚持负压状态，层层过滤系统严峻确保实验室人员不受污染与损伤。P4实验室流程严峻，有必要严峻遵循穿防护、沐浴、更衣、消毒、缓冲流程，进入实验室的科研人员要经过严峻的练习与考试经过。关于外排环境安全控制上也有极高的要求，P4实验室的有害气体排放前，全部的水、气、废弃物有必要经过几层高压灭菌消毒或高温处理合格后才干排放处理掉。

（2）P3实验室

越来越多的P3实验室投入运用，包括复旦大学医学院、云南省疾控中心、福建省农业科学院、上海市公共卫生临床中心、上海市疾病防范控制中心、昆明医学生物学研讨所、安徽疾控中心、浙江大学P3实验室、深圳疾控中心、中科院北京微生物研讨所、我国科学院哈尔滨兽医研讨所、浙江省疾控中心等。制造病毒学实验室,为确保实验室的安全运用,防止微生物污染,参照国际上已有的实验室生物安全水平标准,制造和规化P3实验室(生物安全水平三级BSL-3)。

◆BSL-3一般原则要求

P3实验室内，在确保实验质量的一同，更要确保操作人员安全，根绝环境污染。

实验室内涵确保必定的洁净度条件下，有必要出现必定的负压，确保室内污染气体不泄露，并要对室内污染物和气体进行处理排放。

◆BSL-3 设备系统

平面布局上，留心区分防护区、非防护区、缓冲间，各个区域之间有自动关闭和互锁功用，传递窗也要有互锁和物理消毒设备，一同留心人流和物流分隔。

围护结构上，选材要求光滑耐腐蚀、防水，易于消毒清洁，缝隙密封，并且要求门均能自动关闭。

◆BSL-3修建布局

一方面P3实验室要与公共通道口阻隔，从走廊进口或其他相邻的实验室进人该实验室须经过两道自动关闭的门，通道里有更衣室（可随时淋浴）；另一方面实验室人流物流要分隔，人流是指进入实验室操作人员有必要经过淋浴室一更衣室（正压气闸室）替换作业服--清洁走廊--负压气闸室--实验室，离开实验室次第与进入相反。物流是指全部进入实验室的物品有必要经过另一清洁走廊的传递窗进入，相反实验室内的物品有必要消毒处理后，再经过传递窗传出。

◆BSL-3气压与气体排放

实验室要备有真空系统设备，以确保实验室内必定的负压。这一设备产生从清洁区到实验室污染区的定向气流，排出室外的空气禁绝在修建物内其他区域循环运用，而有必要经过过滤和其他处理程序排出。实验室内各处的压力梯度和洁净度分别为淋浴室的压力为常压；正压气闸室压力为高于常压+10Pa、洁净度为十万级；

清洁走廊压力为-10Pa、洁净度为十万级；负压气闸室压力为-20Pa、洁净度为十万级。

P3负压经过二或三级生物安全高效粒子空气过滤器（过滤功率99.995％）过滤的气体，可直接或经过修建物排气系统排出。经过修建物排气系统排出时，高效粒子空气过滤器要以某种方法（如套简设备联接）联接到该系统上，避免影响生物安全柜或修建物排气系统的气流不平衡。运用二级生物安全柜应至少12个月检测、断定1次，排出的气体可以在实验室内循环。

安全柜内有可以产生气溶胶的连续运转的离心机或其他仪器，气体在进入实验室或周围环境之前，要经过高效粒子空气过滤器过滤。要留心的事项包括：用液体消毒设备和高效粒子空气过滤器或采纳其他相应的设备来维护真空系统，这些防护设备应便于常常维护及时替换；负压气闸室门与负压实验室门要互锁，以确保操作人员进出时，实验室与外界相对隔绝，避免污染区负压大幅上升，室内气体外泄；实验室压力为-30Pa、洁净度为万级（较好的可达五千级）。

◆其他设备

洗手池。P3实验室均应备有洗手池，其出水控制开关应是脚踩式、肘动式或自动开关式，固定在实验室出口附近。

内墙装修资料。墙的内表面、墙的地脚、地上和天花板应光亮、防水，以便于清洗，这些表面上的渗漏处要密封，以便于进行空间消毒。

窗户的预留。假如实验室要留窗子，必定要双层玻璃，以确保必定密封。

物品摆放。实验室物品要固定存放方位，作业台、操作柜和设备之间要便于打扫。 作业台面应不渗水、耐酸碱、耐有机溶剂和中等度耐热。

下水与排污。实验室必要时可留有下水道，平时对外界密封，实验室内排出的污水有必要经过严峻消毒处理方可排出。

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生物安全处理

生物安全处理组织包括生物安全担任人、各实验室生物安全职责人、实验室生物安全处理员、实验室生物安全小组。在职责分工上，实验室生物安全处理员 担任实验室生物安全确保以及技术规章方面的咨询作业，就技术方法、程序和方案、生物因子、资料和设备进行守时的内部安全检查，纠正违反生物安全操作规程的行为。

出现潜在感染性物质溢出或其他事端时，协助事端查询，以及担任检查和监督实验室废弃物的有效处理与安全处置和检查和监督实验室各项消毒灭菌方法的执行情况。

生物安全处理小组担任组织、制定和实施生物安全手册、生物安全规章制度、操作标准和标准操作规程；担任本科室生物安全防护，微生物和生物样本保存和运用，实验室安全操作，实验室废气、废水、废弃物处理和消毒灭菌等规章制度实施情况进行监督检查，并守时点评实施效果；担任组织盯梢国际国内实验室生物安全处理最新动态，供应实验室操作的咨询以确保遵从国家相关的标准；担任守时查询，了解实验室作业人员的健康情况和健康监护情况。抉择必要的特别医学监测；担任组织生物安全常识练习并点评练习效果。

生物安全处理架构

生物安全处理系统文件

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PCR实验室建立及检测留心事项

PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称，是一种分子生物学技术。PCR实验室又称为基因扩增实验室，经过PCR这一分子生物学技术能迅速检测出患者体内病毒含量。

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PCR实验室基础布局

PCR实验室基础布局包括试剂准备区、样本制备区、核酸扩增区和产品分析区。

试剂准备区。区域功用是用于存储试剂和相关耗材，以及制备相关实验反应液。装备仪器包括冰箱、微量加样器、可移动紫外灯、旋涡混匀器、手掌式离心机、专用作业服和温湿度计。

样本制备区。区域功用是用于样本核酸（RNA、DNA）提取、标本及运用过的试剂的暂时保存、储存常用的实验耗材。装备仪器包括旋涡混匀器、冰箱、高速台式离心机、手掌式离心机、微量加样器、可移动紫外灯、恒温金属浴、生物安全柜、冲眼器、温湿度计和专用作业服。

基因扩增区。区域功用是用于对提取好的核酸样本进行扩增检测，一同对实时荧光定量PCR效果进行分析和发布查验效果。装备仪器包括荧光定量PCR仪、可移动紫外灯、专用作业服和温湿度计。

产品分析区。区域功用是首要用于进行扩增片段的测定及效果分析。装备仪器包括杂交仪器/基因测序仪、可移动紫外灯、专用作业服和温湿度计。

试剂准备区（左）和样本制备区（右）

基因扩增区（左）和产品分析区（右）

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PCR实验室规划根据与原则

PCR实验室规划以国家威望发布的《医疗组织临床基因扩增查验实验室处理方法》（卫办医政发〔2010〕194号）、《医疗组织临床基因扩增查验实验室作业导则》为根据，遵循“各区独立、留心风向、因地制宜、便当作业”的“十六字口诀”。其中，各区独立是指在物理空间上，有必要是彻底互相独立的，不能有空气的直接相通；留心风向是指由清洁区域向污染区域活动；因地制宜是指实验室的格式并非单一固定的格式规划，可根据实际情况进行调整。

区域独立与风向活动

因地制宜的格式设置

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新冠疫情下的PCR实验室规划考虑

当前疫情下，快速制造PCR实验室可首要设置3个区域，即试剂储存和准备区、标本制备区、扩增与产品分析区。建议在有条件的实验室尽可能选用负压排风设备（带空气过滤），并选用人流、物流分流方法，打开日常实验。此外，设置专用污物通道及洗消间（可高温高压），实验过程中的废弃物经高温高压后再出实验室。针对无法连续布局的实验室，关键注重标本制备区，建议单独设置负压排风设备。

负压排风设备

人物分流

专用污物通道及洗消间

无法连续布局的实验室单独设置负压排风设备

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实验室防污染处理

实验室污染，是PCR实验室出现实验假阳性、效果不可信，不可靠的重要原因，PCR实验室应当将防污染作为日常处理、实验组织、清洁消毒、实验操作的中心。

PCR 实验污染和细胞污染是有不同的，PCR 实验污染首要是核酸而不是细菌和其他入侵者。实验室污染包括由于样本密封不严外溢、未替换加样枪头、实验器具及耗材未及时消毒灭菌形成的样本间交叉污染；PCR 组分试剂加样过程中，由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照的实验试剂污染；许多仿制的产品泄露或扩增后的PCR反应管意外开盖形成的扩增产品污染；由于实验室震荡、混匀、加热等操作构成气溶胶颗粒而形成的气溶胶污染。

不同原因导致的污染其应对方法也各不相同，比方应对核酸样本溢出形成的污染应立即用布或纸巾掩盖，由外围向中心倾倒10%的次氯酸消毒剂，约30分钟后，根除污染物品，再用次氯酸消毒剂擦拭，并用75%酒精喷洒，移动紫外车定点照射1小时；应对其他不明情况污染应立即暂停全部实验操作，整理实验室内全部物品，寻找污染来历，并加大实验室的通风，对实验室内全部表面（台面、地上及墙面） 进行消毒（75%酒精空中喷雾，一同敞开紫外消毒设备，延长紫外照射时间4小时以上），以上方法每日进行，直至污染消除；用新试剂及供认无污染的器材进行原污染项目的试剂空白检测，连续3次均阴性后方可进行常规检测。

“易查不易察”，污染来的悄然无声，因此，实验室内必定要留心作业走向，作业时的作业走向严峻依照“试剂准备区—样本制备区—核酸扩增区—产品分析区”打开作业，一同全部文件记载或许电子记载都要遵循做你所写，记你所做，脚踏实地。其他还要一点值得注重的是作业人员要有严峻的防污染意识，每个房间有自己的清洁工具，各个房间全部运用器材、耗材均独立运用，不可混用，做到专区专用。

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发热门诊实验室才干制造

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. 基础设备制造关键

◆实验室制造应至少符合医学生物安全二级（BSL-2）实验室标准。实验室应设置在查验科中心实验室和急诊实验室以外的区域，宜在发热门诊区域内。

◆二级及以上医疗组织发热门诊临床实验室面积应至少100平方米（含核酸检测实验室）。因在产生严重公共卫生事情情况下，发热门诊临床实验室生物安全风险明显高于查验科中心实验室和/或急诊实验室，如打开微生物或核酸检测，应在实验室内部再设置独立的控制区域。

◆实验室宜选用独立的通风系统，发热门诊临床实验室应具有清洁区、缓冲区、污染区、更衣间、淋浴间和洗消间等功用区域，做好生物安全防护方法。

◆必要时可运用临建实验室应急，快速进步发热门诊临床实验室检测才干和生物安全防护水平。临建实验室是指组织为满意特定需求暂时制造的实验室，如方舱实验室、可移动实验室等。

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检测仪器及辅佐设备

实验室应选择适用于发热门诊查验作业需求的检测设备。仪器的选型原则是小型化、检测速度快、一机多能。举荐运用闭盖穿刺的仪器设备和全自动检测设备。

标准装备：（1）血液分析仪（闭盖穿刺）（2）全自动尿液分析仪（3）全自动生化分析仪（湿式或干式）（4）全自动免疫分析仪（5）基因扩增仪（6）生物安全型离心机（如带有密闭盖或密封桶）（7）显微镜（8）医用冰箱（冷藏、冷冻）。

建议装备：（1）尿沉渣分析仪（2）全自动粪便分析仪（3）全自动血型分析仪（4）全自动血气分析仪（5）全自动凝血分析仪（6）自动核酸提取仪（7）流式细胞分析仪（8）全自动核酸分析仪（9）血培育仪（10）细菌断定仪等。

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安全设备

生物安全柜。需运用经检测合格的二级生物安全柜（举荐运用AⅡ型、BⅡ型），用于传染性、高风险标本的处理，以及易产生气溶胶的手工操作（如采血管开帽等）。

消毒设备。包括紫外消毒设备、循环风空气消毒机等。

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信息化要求

发热门诊查验对信息化要求一方面要合理标准地设置查验项目；另一方面质量系统文件及相关记载（如质控记载、仪器设备维护保养记载、交接班记载等）电子化，完结网络化处理；还要留心试剂运用处理功用，实时监控试剂存量和效期。

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质量控制与监测

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物资贮藏及处理

实验室要有必定量的物资（试剂、耗材、消毒用品及个别防护装备）贮藏，以满意临床救治的底子需求。

物资贮藏清单包括：（1）常规检测试剂和传染性病原体检测相关的试剂；（2）耗材（病毒采样管、带滤芯的吸头号）；（3）消毒用品（含氯消毒剂，75%乙醇，洗手液等）；（4）个别防护装备；（5）意外事端处理箱；（6）样本转运箱；（7）急救箱；（8）医疗废弃物转运箱等。一同关于试剂、耗材、消毒用品及个别防护装备要进行安全功能检测点评报告。守时点评相关贮藏产品有效期及质量问题，产生器械与试剂不良事情的，需上报医疗质量主管部门及收买主管部门，守时整改。